1- گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران 2- گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران ، m.rabbani@biol.ui.ac.ir 3- گروه ویروس شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران، تهران، ایران
چکیده: (3525 مشاهده)
مقدمه:باکتری کلستریدیوم دیفیسیل عامل ایجاد عفونت بیمارستانی و کولیت غشای کاذب می باشد. توکسین B این باکتری به عنوان یکی از فاکتورهای اصلی بیماری زایی این باکتری شناخته شده است. ناحیه اتصالی پذیرنده(RBD) این توکسین، ناحیه ایمنیزای توکسین شناخته و به گیرنده واقع در روده متصل می شود. هدف این مطالعه کلون نمودن و بیان ناحیه ایمنی زای توکسین B در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس به منظور تهیه واکسن دهانی مطمئن و ایمن علیه کولیت ناشی از کلستریدیوم دیفیسیل، به عنوان یک روش درمانی جایگزین در مطالعات آینده و مبتنی بر لاکتوکوکوس می باشد. مواد و روش ها:ابتدا با استخراج DNA از باکتری کلستریدیوم دیفیسیل و با پرایمرهای طراحی شده، قطعه RBD به روش PCR تکثیر شد. قطعه تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R/T الحاق و در باکتری E.coli ترانسفورم شد. سپس قطعه RBD با برش آنزیمی توسط آنزیمهای NcoI و SacI، از پلاسمید pTZ57R/T خارج و خالص سازی شد. قطعه RBD در پلاسمید بیانی pNZ8149برش خورده با آنزیم های مشابه تحت شرایط مناسبالحاق شد. سپس پلاسمید بیانی pNZ8149 حاوی قطعه با روش الکتروپوریشن درون سلول های مستعد لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شد. یافته های پژوهش:پس از غربالگری کلونی های ترانسفورم شده، صحت کلونینگ با انجام PCR، هضم آنزیمی بر روی پلاسمید نوترکیب استخراج شده و نهایتاً با تعیین توالی، تایید شد. بحث و نتیجه گیری:لاکتوکوکوس لاکتیس تولید کننده این ناحیه ایمنی زا می تواند به منظور تهیه واکسن دهانی مطمئن و ایمن، به عنوان یک روش درمانی جایگزین جهت کاهش شیوع عفونت کلستریدیوم دیفیسیلدر مطالعات آینده مورد استفاده قرار گیرد.
Rahimi Y, Rabbani-Khorasgani M, Zarkesh-Esfahani S H, Emamzadeh R, Keyvani Amineh H, Rezaei M. Cloning of Immunogenic Domain of Clostridium Difficile Toxin B in Lactococcus lactis to Develop an Oral Vaccine Based on
Lactococcus against Clostridium difficile
Associated Colitis
. J. Ilam Uni. Med. Sci. 2019; 27 (4) :25-34 URL: http://sjimu.medilam.ac.ir/article-1-5207-fa.html
رحیمی یاسر، ربانی خوراسگانی محمد، زرکش اضفهانی سید حمید، امام زاده رحمان، کیوانی امینه حسین، رضایی مرضیه. کلونینگ ناحیه ایمونوژنیک توکسین B کلستریدیوم دیفیسیل در لاکتوکوکوس لاکتیس
با هدف توسعه واکسن دهانی مبتنی بر لاکتوکوکوس علیه کولیت
ناشی از کلستریدیوم دیفیسیل
. مجله دانشگاه علوم پزشکی ایلام. 1398; 27 (4) :25-34