fa بهینه‌سازی کشت سلول‌های دندریتیک نابالغ از سلول‌های مغز استخوان موش در شرایط عاری از اندوتوکسین ایمونولوژی immunology پژوهشي Research <strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مقدمه:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">سلول‌های دندریتیک در مطالعات پایه و همچنین تحقیقات دربارۀ واکسن بسیار اهمیت دارند؛ اما جداسازی و کشت این سلول‌ها به علت تعداد اندک در بافت‌ها، با چالش‌هایی روبروست. با توجه به اینکه روش استانداردی وجود ندارد، در این پژوهش، به برخی از عوامل مؤثر در افزایش بازدهی جداسازی سلول‌های دندریتیک از مغز استخوان موش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">BALB/c</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> پرداخته‌شده است.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش‌ها:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">پس از جداسازی سلول‌های مغز استخوان از فمور و تیبیا و هم‌جواری با سایتوکاین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">GM-CSF</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، در روز سوم، نیمی از سلول‌ها به پلیت جدید انتقال داده و در روز پنجم، از اولیگونوکلئوتید </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CpG</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای تحریک سلول‌ها استفاده شد. در روزهای پنجم</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">و هفتم، بقای سلول‌ها و همچنین شاخص‌های فنوتیپی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD11C</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MHC-II</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD86</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> با فلوسایتومتری بررسی گردید.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته‌های پژوهش:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه مشخص شد که</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">حضور اندوتوکسین در مراحل کشت سلول‌های نابالغ، به‌طور معنی‌دار (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P<0.05</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">) سبب کاهش بازیابی سلول‌های دندریتیک می‌شود. علاوه بر این، تعداد کمتر از یک میلیون سلول در پلیت‌های غیرچسبنده سبب بقای بیشتر و بازدهی بالا می‌گردد. انتقال سلول‌ها در روز سوم به پلیت جدید هم به‌عنوان راهکاری برای جلوگیری از بلوغ زودرس سلول‌های دندریتیک و مرگ ناشی از آن معرفی شد. پس از دست‌یابی به سلول‌های نابالغ در مجاورت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">GM-CSF</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، می‌توان برای القای مسیر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Th1</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> از اولیگونوکلئوتید </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CpG</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در روز هفتم استفاده کرد. اختلاف معنا‌دار (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P<0.05</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">) با کنترل نشان داد که </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CpG</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> می‌تواند به‌عنوان محرک در القای بلوغ پس از تیمار با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">GM-CSF</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به‌کار گرفته شود.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بحث و نتیجه&shy;گیری:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بهینه‌سازی کشت سلول‌های دندریتیک به لحاظ شرایط مختلف کشت، نقش مهمی در بازدهی بازیابی این سلول‌ها دارد.</span></span> <em>Introduction:</em> Dendritic cells are very important in basic studies and vaccine research, but isolation and culture of these cells face challenges due to their small number in tissues. Since there is no standard method, we addressed some of the factors affecting the efficiency of dendritic cell isolation and culture from BALB/c mouse bone marrow.<br> &nbsp;<br> <em>Materials & Methods:</em> Bone marrow cells isolated from femur and tibia, were seeded in plates and treated with GM-CSF. On day 3, half of the media was transferred to a new plate with fresh media plus GM-CSF. On day 5, cells were induced with CpG oligonucleotide. Cell survival as well as maturation markers of CD11C, MHC-II and CD86 were investigated by flow cytometry on day 5 (immature cells) and day 7 (mature cells).<br> <em>Ethics code:</em> IR.PII.REC.1395.99<br> &nbsp;<br> <em>Findings:</em> It was found that the presence of endotoxin in the culture of immature cells, significantly reduces the recovery of dendritic cells (p value <0.05). Less than one million cells seeded in non-treated 6-well plates and transfer of cells to a new plate on day 3 increased the efficiency of immature cell retrieval by preventing early maturation and premature death. Further treatment of immature cells with CpG on day 7 was used to induce the Th1 pathway. Significant difference (p value <0.05) with control group showed that CpG induces maturation after treatment with GM-CSF (without IL-4).<br> &nbsp;<br> <em>Discussion & Conclusions:</em> Optimization of dendritic cell culture in terms of different culture conditions highly impacts the efficiency of immature cell formation and maturation.<br> &nbsp; مغز استخوان, سلول‌های دندریتیک, بهینه‌سازی کشت, اندوتوکسین Bone marrow, Dendritic cells, Cell culture optimization, Endotoxin 43 54 http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-6422-3&slc_lang=fa&sid=1 Atefeh Sadeghi Shermeh عاطفه صادقی شرمه atefeh.sadeghi.sh@gmail.com 9600319475328460043476 9600319475328460043476 No Dept of Immunotherapy and Leishmania Vaccine Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه تحقیقات انگل‌شناسی، قارچ‌شناسی و ایمونولوژی، بخش ایمونوتراپی و تحقیقات واکسن لیشمانیا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Sima HAbibzadeh سیما حبیب زاده simahabibzade@gmail.com 9600319475328460043477 9600319475328460043477 No Dept of Immunotherapy and Leishmania Vaccine Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه تحقیقات انگل‌شناسی، قارچ‌شناسی و ایمونولوژی، بخش ایمونوتراپی و تحقیقات واکسن لیشمانیا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Adeleh Taghikhani عادله تقی خانی adeleh.taghikhani@modares.ac.ir 9600319475328460043478 9600319475328460043478 No Dept of Immunology, Faculty of Medicine, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Sima Rafati سیما رأفتی s_rafati@yahoo.com 9600319475328460043479 9600319475328460043479 No Dept of Immunotherapy and Leishmania Vaccine Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه تحقیقات انگل‌شناسی، قارچ‌شناسی و ایمونولوژی، بخش ایمونوتراپی و تحقیقات واکسن لیشمانیا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Negar Seyed نگار سید n_seyed@gmail.com 9600319475328460043480 9600319475328460043480 Yes Dept of Immunotherapy and Leishmania Vaccine Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه تحقیقات انگل‌شناسی، قارچ‌شناسی و ایمونولوژی، بخش ایمونوتراپی و تحقیقات واکسن لیشمانیا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران