fa مطالعه تجربی بیان Ki67، POU5F1 و zbtb16 در سلول های بیضه خوک و موش با استفاده از روش ایمنوسیتوشیمیایی و RT-PCR بیوتکنولوژی biotechnolohgy پژوهشي Research <strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مقدمه:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">سلول های بنیادی اسپرم ساز، بنیانگذار و نقطه شروع اسپرماتوژنز هستند و تنها سلول هـای بنیـادی در بـدن بـه شـمار مـی آینـد کـه می توانند از طریق گامت زایی اطلاعات ژنتیکی را به نسل بعدی منتقل کنند؛ هدف از تحقیق حاضر، بررسی ماهیت پرتوانی سلول های بنیادی اسپرم ساز در شرایط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">in vitro</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">in vivo</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> است.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش ‌ها:</span></span></em></strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> سلول های اسپرم ساز از بیضه خوک و موش با استفاده از روش هضم آنزیمی استخراج شده و در محیط حاوی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">FGF</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EGF</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">GDNF</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و سلول های تغذیه کننده </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">STO</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> کشت داده شدند. سپس</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">برای بررسی ایمنوسیتوشیمیایی و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RT-PCR</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> کلونی های حاصله از مارکرهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Ki67</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">POU5F1</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ZBTB16</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> استفاده شد.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته ‌های پژوهش:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ماهیت سلول های بنیادی اسپرماتوگونی حاصــله پس از جداسازی و کشت، به وسیله معیار هایی نظیر رشد خوشه ای کلنی ها در محیط کشت، بیان مارکر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Ki67</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> طی بررسی ایمنوسیتوشیمیایی که بیانگر قابلیت تکثیر است و شاخص های مورفولوژیکی مشاهده شده با میکروسکوپ الکترونی نگاره، ثابت شد. هم چنین آنالیز مقایسه بیان مارکر های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">POU5F1</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ZBTB16</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در سلول های بنیادی جنینی، سلول های بنیادی اسپرم ساز و سلول های سرتولی موجود در لوله اسپرم ساز موش با استفاده از روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RT-PCR</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> را در نشان داد.</span></span><br> <strong><em><span dir="RTL"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بحث و نتیجه گیری:</span></span></span></em></strong> <span dir="RTL"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">طی این پژوهش بیان مارکر های</span></span></span><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Ki6 </span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span></span><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">POU5F1</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span></span><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ZBTB16</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در لوله اسپرم ساز و ویژگی های سیتولوژیک سلول های بنیادی اسپرم ساز مورد مطالعه قرار گرفت به طوری که یافته های حاصل می تواند در تحقیقات پیشرفته حوزه بیولوژی تولید مثل مفید باشد.</span></span></span> <strong><em>Introduction:</em></strong> Spermatogonial Stem Cells (SSC) are the originators and beginning points of the spermatogenesis process. Moreover, they are considered the only stem cells in the body that could transfer genetic information to the next generation through gametogenesis. This study aimed to investigate the potency and power of SSC under in vitro and in vivo conditions.<br> &nbsp;<br> <strong><em>Materials & Methods:</em></strong> &nbsp;Enzymatic digestion technique was utilized to extract the spermatogonial cells of the pig and mouse&#39;s testis. They were then cultured in an environment containing FGF, EGF, GDNF, and a feeder layer of STO. &nbsp;For immunocytochemistry and RT-PCR analysis, Ki67, POU5F1, and ZBTB16 markers were used to evaluate the resulted colonies.<em> Ethics</em> <em>code:</em> Ir.ausmt.rec.1398.03.07<br> &nbsp;<br> &nbsp;<br> <strong><em>Findings:</em></strong> The nature of the SSC resulted after separation and culture was proved through measures, such as cluster growth of the colonies in the culture medium, Ki67 marker expression in the immunocytochemistry review which showed the duplication ability, and the morphological criteria observed by an electron microscope. Moreover, the comparative expression of POU5F1 and ZBTB16 markers in the embryonic stem cells, SSC, and Sertoli cells within the seminiferous tubules of the mouse was analyzed by RT-PCR.<br> &nbsp;<br> <strong><em>Discussions & Conclusions:</em></strong> This experimental study investigated the expression of Ki67, POU5F1, and ZBTB16 in the seminiferous tubules and special cytological features of SCC. The findings are beneficial for future advanced studies in reproductive biology fields.<br> &nbsp; سلول های بنیادی پرتوان, سلول های بنیادی موش, سیتولوژی, پروتئین Pou5f1, zbtb16 Cytology, Mouse embryonic stem cells, Pluripotent stem cells, Pou5f1 protein, Zbtb16 1 10 http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5755-2&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Azizi حسین عزیزی hosseinazizi1358@gmail.com 9600319475328460042661 9600319475328460042661 Yes Faculty of Biotechnology, Amol University of Special Modern Technologies, Amol, Iran گروه زیست فناوری میکروبی، دانشکده زیست فناوری، دانشگاه تخصصی فناوری های نوین آمل، آمل، ایران Amirreza Niazi Tabar امیررضا نیازی تبار amirrezaniazitabar97@yahoo.com 9600319475328460042662 9600319475328460042662 No Faculty of Biotechnology, Amol University of Special Modern Technologies, Amol, Iran گروه زیست فناوری میکروبی، دانشکده زیست فناوری، دانشگاه تخصصی فناوری های نوین آمل، آمل، ایران Atiyeh Mohammadi عطیه محمدی atiyehmohamadi74@yahoo.com 9600319475328460042663 9600319475328460042663 No Faculty of Biotechnology, Amol University of Special Modern Technologies, Amol, Iran گروه زیست فناوری میکروبی، دانشکده زیست فناوری، دانشگاه تخصصی فناوری های نوین آمل، آمل، ایران