fa زیر همسانه سازی و بیان آنتی ژن کایمر C-CFTX1-STxB زهر عروس دریایی و بررسی آنتی ژنیسیتی آن در موش سوری بیولوژی biology پژوهشي Research <strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مقدمه:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">گزش عروس &shy;دریایی جعبه &shy;ای دردناک بوده و می&shy; تواند مهلک باشد. زهر گونه </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">C. fleckeri</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> حاوی انواع پروتئین &shy;های فعال زیستی است</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> دو مورد از فراوان &shy;ترین پروتئین &shy;های موجود در این گونه، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CfTX-1</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CfTX-2</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> است که با استفاده از روش الکتروفورز یا کروماتوگرافی به راحتی قابل جداسازی نمی باشند. فناوری بیان نوترکیب، جایگزینی مناسب برای جداسازی پروتئین طبیعی زهر می باشد. هدف از این مطالعه، بیان</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">C-CfTX1-STxB</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">E.coli</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و بررسی آنتی</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ژنیسیتی آن در موش</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">سوری می</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">باشد.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش ها:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ژن کامل </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CfTX1</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> صناعی در پلاسمید </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">pUC57</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تهیه شد. قطعه </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CfTX-1</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">C-</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به وسیله</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;تکثیر و با جایگاه های آنزیمی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">BamHI</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">SalI </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;در وکتور بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">pET28a-stxB</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> زیر همسانه &shy;سازی و به باکتری </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">E.coli</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ترانسفورم شد. بیان ژن تحت القای</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">IPTG </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;انجام گردید. پس از تخلیص پروتئین و تزریق به موش</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">سوری، میزان آنتی</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بادی تولید شده در سرم اندازه گیری شد. هم چنین موش</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ها به وسیله زهر عروس دریایی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Rhopilema nomadica</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> چالش شدند.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته های پژوهش:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه تجربی، ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">C-CfTX1-STxB</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، کلون شده در وکـــتور بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">pET28a(+)</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به وسیله </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، توالی یابی و با آنالیز آنزیمی تایید گردید</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> هم چنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله وسترن تایید شد</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> آنتی</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بادی تولید شده در سرم، توسط تست الایزا کمیت</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">سنجی شد.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بحث و نتیجه گیری:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">موش &shy;های ایمن شده در چالشی پس از 60 روز، 50 برابر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LD50</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> زهر عروس دریایی را تحمل می</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">نمایند. با توجه به عدم خاصیت کاردیوتوکسیستی و نوروتوکسیستی پروتئین نوترکیب، این پروتئین تولید شده می تواند به عنوان کاندید واکسن زهر عروس دریایی در موش سوری یا در مراحل بعدی کارآزمایی بالینی برای انسان پیشنهاد شود.</span></span> <em>Introduction:</em> Box jellyfish stings are painful and may be life-threatening. The venom of Chironex fleckeri contains a variety of bioactive proteins as well as two of the most abundant proteins, namely CfTX-1 and CfTX-2 which cannot be isolated easily using electrophoresis or chromatography techniques. Recombinant expression technology may offer an alternative to the isolation of native C.fleckeri venom protein. This study aimed at expressing C-CfTX1-STxB protein in Escherichia coli and assessing its antigenicity in Syrian mice.<br> &nbsp;<br> <em>Materials & Methods: </em>Synthesis&nbsp;of the artificial CfTX1complete gene was prepared in plasmid pUC57. The C-cftx1 was cloned using a polymerase chain reaction (PCR) and subcloned with BamHI and SalI restriction enzyme sites in pET28a-stxB expression vector and transformed into E.coli. Gene expression was artificially induced by Isopropyl &beta;- d-1-thiogalactopyranoside. After the purification of the protein and its injection into the Syrian mice, the amount of produced antibody was measured in the serum. The rats were also challenged by the venom of the jellyfish (i.e., Rhopilema nomadic).<br> &nbsp;<br> <em>Findings:</em> In this experimental study, the C-CfTX1-STxB gene was cloned in the expression vector pET28a (+), sequenced by PCR, and analyzed by enzymatic analysis. Moreover, the produced recombinant protein was confirmed by Western blotting. The produced antibody in the serum was quantified using an enzyme-linked immunosorbent assay.<br> &nbsp;<br> <em>Discussion & Conclusions:</em> After 60 days, the immunized mice tolerated 50x LD50 of jellyfish venom. Considering the ineffectiveness of cardiotoxicity and neurotoxicity of the recombinant protein, this produced protein can be suggested as a jellyfish venom vaccine candidate in Syrian mice or at a later stage of a clinical trial in humans. Chironex fleckeri , زهرعروس‌دریایی, آنتی‌ژن کایمر C-CfTX-1-STxB , آنتی‌ژنیسیتی Antigenicity, C-CFTX1-STxB chimeric antigen, Chironex fleckeri, Jellyfish venom 24 36 http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5241-1&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Honari حسین هنری honari.hosein@gmail.com 9600319475328460040593 9600319475328460040593 Yes Biological Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein Comprehensive University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Seyed Mojtaba Aghaie سید مجتبی آقایی mojtabaasefi@yahoo.com 9600319475328460040594 9600319475328460040594 No Biological Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein Comprehensive University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Mehdi Hosseinzade مهدی حسین زاده kevin.hosseinzade@gmail.com 9600319475328460040595 9600319475328460040595 No Biological Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein Comprehensive University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران