fa مقایسه تیتر آنتی بادی تولید شده بر علیه پروتئین‌ های نوترکیب BLF1 و BLF1-STxB در رت‌ های آزمایشگاهی پژوهشي Research <ul> <li dir="RTL" style="margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">باکتری بورخولدریا&shy;سودومالئی عامل بیماری میلوئیدوزیس و باکتری شیگلا&shy;دیسانتری شایع &shy;ترین عامل اسهال است و تاکنون هیچ واکسن موثری علیه این دو باکتری تولید نشده است. پروتئین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> باکتری بورخولدریا سودومالئی نقش مهمی در ایجاد بیماری &shy;زایی و عفونت دارد. </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">STxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> شیگلا&shy;دیسانتری یکی از فاکتورهای مهم در بیماری &shy;زایی است و هم چنین دارای نقش یاوری و حاملی است. ترکیب پروتئین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">STxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> می &shy;تواند کاندیدای مناسبی برای واکسن باشد. در این مطالعه تیتر آنتی &shy;بادی پروتئین &shy;های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1-STxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در رت با یکدیگر مقایسه شد.</span></span></li> </ul> <strong><em><span style="font-family:b mitramso-ascii-font-family:times new roman;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش ها:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه تجربی وکتورهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pET28a(+)-blf1-stxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp; و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pET28a(+)-blf1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به باکتری </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BL21(DE3)</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">E. coli</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تراریخت و توسط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تایید شدند. بیان ژن &shy;های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">blf1-stxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">blf1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تحت القای </span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;"><a href="https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwiazNads5HXAhVHCsAKHcUEBpMQFgg2MAI&url=http%3A%2F%2Fwww.sigmaaldrich.com%2Fcatalog%2Fproduct%2Froche%2Fiptgro&usg=AOvVaw2XNJgwXPKFVV4K4rv2z8Bk"><span dir="LTR" style="text-decoration:none;text-underline:none;"><span style="color:windowtext;">Isopropyl-&beta;-D-thiogalactoside</span></span></a></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی، پروتئین &shy;های حاصل در چهار نوبت به رت تزریق شد. آنتی بادی پلی کلونال تولید شده در سرم رت &shy;ها اندازه گیری شد.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitramso-ascii-font-family:times new roman;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته &shy;های پژوهش:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین &shy;های نوترکیب تولید شده به وسیله </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">SDS-PAGE</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و لکه &shy;گذاری وسترن مورد تایید قرار گرفتند. نتایج الایزا نشان داد که آنتی &shy;بادی علیه آنتی ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تولید شده و با ترکیب </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">STxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> میزان تیتر آنتی بادی نسبت به تیتر آنتی بادی علیه آنتی ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> افزایش یافته است.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitramso-ascii-font-family:times new roman;"><span style="font-size:10.0pt;">بحث و نتیجه گیری:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1-STxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تیتر آنتی بادی بیشتری نسبت به </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BLF1</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> داشت. به علت شباهت ساختاری زیر واحد </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">STxB</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> با همتای آن در باکتری اشرشیاکلی می &shy;تواند کاندیدای واکسن علیه بورخولدریا سودومالئی، شیگلا دیسانتری، باکتری اشرشیاکلی انتروهموراژیک</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">(EHEC)</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و اشرشیا انترو توکسینوژنیک</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">(ETEC)</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> باشد.</span></span> <ul style="list-style-type:circle;"> <li>Burkholderia pseudomallei causing Melioidosis and Shigella dysenteriae is the most common cause of diarrhea, and so far no effective vaccine has been produced against these two bacteria. The BLF1 protein of Burkholderia pseudomallei bacteria plays an important role in pathogenesis and infection. Shigella dysentery STxB is one of the most important factors in pathogenesis and also has an adjuvant role. Binding the BLF1 protein with STxB can be a good candidate vaccine. In this study, the antibody titers of BLF1-STxB and BLF1 proteins produced in rats were compared.&nbsp;</li> </ul> &nbsp;<br> <em>Materials & Methods: </em>In this experimental study, pET28a (+) - blf1-stxB and pET28a (+) - blf1 vectors were transformed into E. coli BL21 (DE3) and confirmed by PCR. The expression of blf1-stxB and blf1 genes was induced by IPTG and the proteins were injected into rats four times after purification of the protein by using an affinity chromatography column. Polyclonal antibodies produced in the serum of rats were measured.<br> &nbsp; <ul style="list-style-type:square;"> <li>The produced recombinant proteins were approved by SDS-PAGE and Western blotting. ELISA results showed that antibody was produced against the BLF1 antigen and the antibody titer level increased by STxB binding to BLF1, compared with the antibody titer against the BLF1 antigen.</li> </ul> &nbsp;<br> <em>Discussion & Conclusions:</em> The BLF1-STxB protein had higher antibody titer than BLF1. Due to the structural similarity of STxB subunit with its counterpart in E. coli, it can be a vaccine candidate against Burkholderia pseudomallei, Shigella dysenteriae, enterohemorrhagic E. coli, and enterotoxigenic E. coli.<br> &nbsp; بورخولدریا سودومالئی, شیگلا دیسانتری, میلوئیدوزیس, BLF1, STxB Burkholderia pseudomallei, Shigella dysenteriae, Melioidosis, BLF1, STxB 111 121 http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4113-1&slc_lang=fa&sid=1 Mehdi Masoudi Kerahroudi مهدی مسعودی کرهرودی mehdi.masoudi.k@gmail.com 9600319475328460038088 9600319475328460038088 No Dept of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein Comprehensive University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Hosein Honari حسین هنری honari.hosein@gmail.com 9600319475328460038089 0000.0002-991B-3109 Yes Dept of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein Comprehensive University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Seyed masih E'temad aubi سید مسیح اعتمادایوبی masih.etemadi@gmail.com 9600319475328460038090 9600319475328460038090 No Dept of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein Comprehensive University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Masoud Abdollahi مسعود عبدالهی ma.abdollahi102@yahoo.com 9600319475328460038091 9600319475328460038091 No Dept of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein Comprehensive University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران