fa شناسایی و بررسی جهش های ژن norA توسط توالی یابی نوکلئوتیدی در استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به سیپروفلوکساسین در شهرستان سنندج پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مقدمه:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">فلوروکوینولون &rlm;ها از جمله آنتی&shy; بیوتیک&rlm; های مفید در مقابل عفونت&shy; های ناشی از باکتری استافیلوکوکوس اورئوس می &rlm;باشند اما امروزه ایجاد مقاومت نسبت به این دسته از آنتی &rlm;بیوتیک&rlm; ها یکی از مشکلات جدی در روند درمان بیماران به شمار می &shy;رود. از جمله مکانیسم&rlm; های ایجاد مقاومت فلوروکوینولونی در این باکتری&rlm; ها بیان بیش از حد ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">norA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> می &rlm;باشد که در این مطالعه بررسی شده است.</span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش &shy;ها:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه تعداد 50 سویه استافیلوکوکوس اورئوس از بیماران مبتلا به عفونت بینی در شهرستان سنندج جدا گردید و با استفاده از آزمایشات بیوشیمیایی مرسوم تعیین هویت شدند، آزمایش دیسک دیفیوژن برای بررسی مقاومت آنتی &shy;بیوتیکی و آزمایش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای بررسی ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">norA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> انجام گرفت، سپس محصولات آزمایش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای آزمایش توالی &rlm;یابی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به شــرکت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Bioneer</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ارسال شدند. بر اساس نتایج توالی&rlm; یابی و&nbsp; ترجمه &rlm;گر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Expasy</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> جهش&rlm; های نوکلئوتیدی و آمینواسیدی بررسی شد. </span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته &rlm;های پژوهش:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج آزمایشات بیوشیمیایی به صورت کواگولاز، تخمیر قند مانیتول، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">DNase</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و همولیز مثبت، حساس به نووبیوسین و مقاوم به پلی &shy;میکسین بودند. مقاومت به آنتی&shy; بیوتیک &rlm;های استفاده شده به صورت اکساسیلین(42 درصد)، اریترومایسین(46 درصد)، داکسی &rlm;سیلین(10 درصد)، آمیکاسین(20 درصد)، تتراسایکلین(24 درصد)، پنی&rlm; سیلین(68 درصد)، سیپروفلوکــساسین(10 درصد)، ونکـــومایســـین(6 درصد) و نالیدیکسیک &rlm;اسید(70 درصد) بود. همه سویه&rlm; های مقاوم دارای ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">norA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> بودند و با بررسی توالی&rlm; </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، 4 جهش نقطه&shy; ای نوکلئوتیدی یکسان، به ترتیب</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">G491-> A </span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">C537-> T</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">A585-> G</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">C593-> T</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> شناسایی و پس از ترجمه در جایگاه 315 آمینواسید آسپارتیک اسید(</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">D</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">) به گلایسین(</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">G</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">) تبدیل شده بود. </span></span><br> <strong><em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بحث و نتیجه &rlm;گیری:</span></span></em></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">در 4</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">سویه استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به سیپروفلوکساسین جهش نوکلئوتیدی و آمینواسیدی مشترک مشاهده شد لذا لازم است مطالعات بیشتر انجام شود که آیا جهش &shy;های ذکر شده قطعاً عامل افزایش بیان این ژن هستند یا خیر.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></span><br> &nbsp;</p> <div><p align="right" dir="RTL"></p></div> <p style="text-align: justify;"><em><span dir="LTR">Introducrtion:</span></em><em>Introduction:</em> Fluoroquinolones are among useful antibiotics against infections caused by Staphylococcus aureus, but today resistance to these classes of antibiotics is a serious problem in patient&rsquo;s treatments. Overexpression of norA gene is a Fluoroquinolone resistance mechanism in Staphylococcus aureus to be studied through our investigation.<br> &nbsp;<br> <em>Materials & Methods:</em> In this study, 50 Staphylococcus aureus strains were isolated from nasal infection in Sanandaj town. These strains were then identified by conventional biochemical tests. Disk diffusion testing for antibiotic resistance assessment and PCR for existence of norA gene were done. Then, PCR products were sent to Bioneer Company for sequential testing. As a result, nucleotides and amino acid mutations were studied, based on sequencing results and Expasy translator.<br> &nbsp;<br> <em>Findings:</em> The results of biochemical tests were as coagulase, mannitol fermentation, DNase and hemolysis positive, novobiocin sensitive and <a href="https://www.google.com/search?q=polymyxin&spell=1&sa=X&ved=0ahUKEwjZ-_j71t3bAhXBfFAKHaZvBvgQkeECCCMoAA">polymyxin</a> resistance. Oxacillin (42%), erythromycin (46%), doxycyclin (10%), amikacin (20%), tetracycline (24%), penicillin (68%), ciprofloxacin (10%), vancomycin (6%), nalidixic acid (70%) were the antibiotics to which resistance rate was assessed. All the resistance strains had norA gene and 4 identical points of mutation were identified as, G491->A, C537-> T, C593-> C and A585->G respectively. Then, after translation in D315 base, aspartic acid (D) had been converted into Glycine (G).<br> <br> <br> <em>Discussion & Conclusion:</em>&nbsp; According to our results, common nucleotide and amino acid mutations were observed in four strains of ciprofloxacin resistant Staphylococcus aureus. Therefore, more studies are needed to find out if the mentioned mutation is the cause of overexpression of norA.</p> استافیلوکوکوس اورئوس, دیسک دیفیوژن, بلاست, Expasy, توالی ‌یابی staphylococcus aureus, disk diffusion, blast, expasy, sequencing 133 140 http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2726-4&slc_lang=fa&sid=1 sheida sadat zonoori شیدا السادات ذوالنوری sheidazonoori@gmail.com 9600319475328460039096 9600319475328460039096 Yes Young Researchers and Elite Club, Sanandaj Branch, Islamic Azad University, Sanandaj, Iran باشگاه پژوهشگران جوان و نخبگان، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران Sabriyeh Amini صبریه امینی sheeidazonoori@yahoo.com 9600319475328460039097 9600319475328460039097 No Dept of Cellular and Molecular Biology, Islamic Azad University, Sanandaj, Iran گروه زیست شناسی سلولی و مولکولی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران