Journal of Ilam University of Medical Sciences

fa شناسایی و تعیین توالی ژنوتیپ ‌های ایزوله ‌های اکینوکوکوس گرانولوزوس در سگ ‌های ولگرد با استفاده از ژن Cox1 در ایلام، غرب ایران Determination and Sequencing of Genotypes of Echinococcus granulosus from Stray Dogs isolates with Cox1 Gen in Ilam, West of Iran انگل شناسی پزشکی medical parasitology پژوهشي Research مقدمه: هیداتیدوزیس یکی از بیماری های مشترک انگلی بین انسان و حیوان و از رده سستودها با انتشار جهانی است. بیماری از دو بعد بهداشت عمومی و خسارت های اقتصادی دارای اهمیت فراوانی می باشد. این انگل تنوع ژنتیکی بسیار بالایی دارد و شامل کمپلکسی از ژنوتیپ های مختلف است. معمولاً در مناطق آندمیک از لحاظ بیولوژی، تنوع ژنتیکی نسبتاً زیادی در انگل وجود دارد که بر چرخه زندگی انگل، مسیرهای انتقال، بیماری زایی، آنتی ژنیسیتی، ایمنی زایی، پاسخ به داروها، همه گیر شناسی و کنترل این بیماری تاثیرگذار است. این مطالعه با هدف بررسی تنوع ژنوتیپی انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در ایزوله های سگ های ولگرد در شهرستان ایلام در غرب ایران انجام شد. مواد و روش ها: انگل بالغ از روده کوچک سگ های ولگرد جمع آوری شد. پس از استخراج DNA، نواحیmitDNA-cox1 با PCR تکثیر و محصولات PCR با روش PCR-RFLP با دو آنزیم Alu1 وHpaII  آنالیز شدند. برای تایید نتایج PCR-RFLP تعدادی از محصولات PCR تعیین سکانس شدند. با استفاده از نرم افزار MEGA6 آنالیز انجام شد. یافته های پژوهش: از مجموع 75 نمونه سگ،  تعداد 20 نمونه(66/26 درصد) به انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس آلوده بودند. اندازه قطعات تکثیر یافته با cox1تمام ایزوله ها در PCR دارای باندهای مشابه و برابر bp450 بود. الــگو قطعـــات حـــاصل از PCR-RFLP با آنزیم Alu1 دو قطعه 175 و 275 و با آنزیم HpaII 265 و 185 جفت باز به دست آمد. بر اساس نتایج  PCR-RFLP و تعیین توالی همه ایزوله های سگ ژنوتیپ های مشابهی نشان دادند. آنالیزهای مولکولی و فیلوژنتیکی مشخص کرد که این ژنوتیپ ها با موارد ثبت شده در بانک ژن جهانی 100-99 درصد مشابهت و هم پوشانی داشتند. بحث و نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که تشابه بین اندازه قطعات باندهای  DNAاکینوکوکوس گرانولوزوس در ایزوله های سگ با روش های PCR-RFLP و تعیین توالی وجود دارد که بیانگر وجود ژنوتیپ های متشابه انگل در منطقه ایلام است و حداقل یک ژنوتیپ از انگل حضور دارد که متعلق به کمپلکس اکینوکوکوس گرانولوزوس سنسو استریکتو(G1-G3) می باشد. این مطالعه دارای اهمیت بهداشی و محیطی است زیرا بیماری خاستگاه حیوانی دارد و محیط پیرامون انسان را آلوده می سازند. این اطلاعات دلیلی بر اهمیت کنترل همه گیر شناسانه و پیشگیری در بخش های پزشکی و دام پزشکی می باشد. Introduction: Hydatidosisis one of the most common diseases of human and animals from Cestoda class with worldwide distribution. This disease of both public health and economic damage is very important. This parasite has a high genetic diversity and includes a complex of different genotypes .Usually in areas where disease is endemic; biologically there is a relatively high genetic diversity in parasites. Studies in different parts of the world demonstrate that genotype variation and the nature of Echinococcus granulosus influenced on the life cycle of parasite, transmission routes, pathogenesis, and antigenicity, immunogenicity, response to medication, epidemiology and control of the disease. The main aim of the present study was to investigate genotype diversity of E. granulosus which was isolated from stray dogs in Ilam city, West of Iran. Materials & methods: Adult worms were collected from the small intestine of the stray dogs. DNA was extracted from the adult worms and the partial mitochondrial DNA Cytochrome Oxidasesubunit 1 (Cox1) was amplified by PCR then the products were digested by using Alu1 and HpaII restriction enzymes. Finally, a number of PCR products were bidirectionally sequenced. Sequence and phylogenetic analyses were performed using MEGA6 (Mega software. net). Findings: Totally, twenty stray dogs out of 75 (26.66%) showed infection with E. granulosus. Amplified PCR product for all isolates was a band of approximately 450bp. Alu1 digested the product into two bands of approximately 175bp and 275bp fragments, while the HpaII cut the product into 265bp and 185bp fragments for all dog samples. Based on the DNA sequencing and PCR-RFLP results, dog samples indicated to pertain the genotypic similarities. According to the phylogenetic tree, there is at least one genotype of parasite, which belongs to E. granulosous sensu stricto (G1–G3) complex and overall isolates sequences of mtDNA indicated 100 % homology with references G1, G2, and G3 sequences in the GenBank database. Discussion & conclusions: The results of this study indicated that genotypic similarities between the sizes of DNA bands of E. granulosus from all isolates with PCR-RFLP and sequencing methods indicated the occurrence of similarities genotypes of E.granulosus in Ilam region. There is at least one genotype of parasite, which belongs to E. granulosous sensu stricto(G1-G3)complex. تعیین توالی, ایلام, PCR-RFLP,اکینوکوکوس گرانولوزوس, ژنوتیپ Echinococcus granulosus, Genotypes, PCR-RFLP, Sequencing, Ilam 97 106 http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-983-6&slc_lang=fa&sid=1 Morteza Shamsi مرتضی شمسی shamsi_ilam@yahoo.com 9600319475328460033207 9600319475328460033207 No Dept of Parasitology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. گروه انگل شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Abdolhoseyn Dalimi عبدالحسین دلیمی Dalimi4@yahoo.com 9600319475328460033208 9600319475328460033208 Yes Dept of Parasitology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. گروه انگل شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Afra Khosravi افرا خسروی afrakhosravi@co.uk 9600319475328460033209 9600319475328460033209 No Dept of Immunology , Faculty of Medicien, Ilam University of Medical Sciences, Ilam, Iran گروه ایمنی شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایلام، ایلام، ایران Fatemeh Ghafari fard فاطمه غفاری فر ghafarif@modares.ac.ir 9600319475328460033210 9600319475328460033210 No Dept of Parasitology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. گروه انگل شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Fazel Pourahmad فاضل پوراحمد fpourahmad@gmail.com 9600319475328460033211 9600319475328460033211 No Dept of Microbiology , Faculty of Veterinary Medicien, Ilam University, Ilam, Iran گروه میکروب شناسی، دانشکده دام پزشکی، دانشگاه ایلام، ایلام، ایران