fa تولید سازه نوترکیب با همسانه سازی ژن دومین 4 آنتی ژن حفاظتی و هم جوشی آن با ژن دومین 1 فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس در اشرشیاکلی باکتری شناسی Bacteriology پژوهشي Research <div align="justify" style="direction: rtl"> <div> <p></p> </div> <p dir="RTL"><strong><em>مقدمه: </em></strong>سیاه زخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده این بیماری مهلک باکتری باسیلوس آنتراسیس می &shy;باشد. در حال حاضر آنتی ژن حفاظتی(<span dir="LTR">PA</span>) به عنوان واکسن موثر سیاه زخم مورد استفاده قرار می&shy;گیرد. دومین 4 این آنتی ژن به همراه دومین 1 فاکتور کشنده(<span dir="LTR">LF</span>)، ایمونوژن &shy;های قوی این باکتری بوده و به عنوان کاندید مناسب واکسن علیه آن مطرح می باشند. هدف ما در این تحقیق، همسانه سازی ژن دومین 4 آنتی ژن حفاظتی(<span dir="LTR">PAD4</span>) و هم جوشی آن با ژن دومین 1 فاکتور کشنده(<span dir="LTR">LFD1</span>) باکتری، به منظور بررسی توانایی آن ها در القاء ایمنی حفاظتی می باشد.</p> <p dir="RTL"><strong><em>مواد و روش ها: </em></strong>در این مطالعه تجربی، از یک وکتور <span dir="LTR">pGEM-T easy</span> نوترکیب حاوی ژن&shy; <span dir="LTR">LFD1</span> استفاده شد. سپس ژن <span dir="LTR">PAD4</span> با واکنش آنزیمی <span dir="LTR">PCR</span> تکثیر و جداسازی شده و به طور جداگانه در وکتور <span dir="LTR">pGEM-T easy</span> دیگری همسانه سازی گردید. بعد از آن واکنش الحاق ژن <span dir="LTR">PAD4</span> به ژن <span dir="LTR">LFD1</span> در وکتور فوق با تعیین جهت گیری <span dir="LTR">LFD1</span> و توسط جایگاه های آنزیمی <span dir="LTR">PstI</span> و <span dir="LTR">XbaI</span> انجام پذیرفت. سازه نوترکیب حاصل از دو ژن فوق در ناقل بیانی <span dir="LTR">pET28a</span> به کمک آنزیم های محدود الاثر <span dir="LTR">BamHI</span> و <span dir="LTR">XhoI</span> زیر همسانه سازی گردید و پس از تعیین جهت گیری ژن ها، میزبان بیانی <span dir="LTR">BL21</span> توسط این ناقل نوترکیب تراریخت گردید.</p> <p dir="RTL"><strong><em>یافته های پژوهش:</em></strong> همسانه سازی اولیه و هم جوشی قطعات ژنی <span dir="LTR">PAD4</span> و <span dir="LTR">LFD1</span> در ناقل <span dir="LTR">pGEM-T easy</span> با موفقیت انجام شد و پس از تایید فرآیند فوق با دو روش برش آنزیمی و <span dir="LTR">PCR</span>، سازه نوترکیب حاصل با موفقیت در <span dir="LTR">pET28a</span> زیر همسانه سازی شد.</p> <p dir="RTL"><strong><em>بحث و نتیجه گیری:</em></strong> با توجه به ایمونوژن بودن نواحی <span dir="LTR">PAD4</span> و <span dir="LTR">LFD1</span>، بیان پروتیئن این سازه نوترکیب حاصل از نواحی ژنی الحاق شده فوق، می تواند برای القاء ایمنی محافظتی، به عنوان کاندید مناسب واکسن سیاه زخم مطرح باشد.</p> <p></p> <p></p> </div> <p><em>Introduction:</em> Anthrax is a zoonotic disease. Bacterium Bacillus anthracis is the causative agent of the fatal disease. At present, the protective antigen (PA) is used as an effective vaccine against anthrax. Domain 4 of this antigen together with domain 1 of lethal factor (LF) are the potent immunogens of this bacteria and are as suitable candidates of vaccine against it. Our aim in this study is the cloning of protective antigen domain 4 (PAD4) genes and fusion of it with lethal factor domain 1 (LFD1) gene of the bacteria to evaluate their capability in protective immunity induction.</p> <p><em>Materials </em><em><span dir="RTL">&</span></em><em> methods:</em> In this experimental study, we used a recombinant pGEM-T easy vector containing LFD1 gene. Then PAD4 gene was amplified and isolated by PCR and cloned into another pGEM-T easy vector, separately. After that, ligation of PAD4 gene and LFD1 gene was done in mentioned vector with determination of LFD1 orientation and by PstI/XbaI restriction sites. The recombinant construct, resulted from these genes was sub-cloned into pET28a expression vector using BamHI/ XhoI restriction enzymes and after determination of genes orientation, the expression host BL21 was transformed by this recombinant vector.</p> <p></p> <p><em>Findings:</em> First cloning and fusion of PAD4 and LFD1 gene fragments were successfully carried out in pGEM-T easy vector and after the confirmation of mentioned process by both of enzymatic digestion and PCR methods, the result recombinant construct was sub-cloned into pET28a.</p> <p></p> <p><em>Discussion & Conclusions: </em>Since PAD4 and LFD1 are immunogenic regions, expression of the recombinant construct resulted from these ligated genes can be proposed as proper candidate of anthrax vaccine for induction of protective immunity.</p> باسیلوس آنتراسیس, آنتی ژن حفاظتی(PA), فاکتور کشنده(LF), هم جوشی, کاندید واکسن Bacillus anthracis, Protective antigen (PA), Lethal factor (LF), Fusion, Vaccine candidate 18 27 http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2382-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Najarasl محمد نجاراصل mnajar62@gmail.com 9600319475328460025374 9600319475328460025374 No Comprehensive University of Imam Hossein, Tehran, Iran. دانشگاه جامع امام حسین(ع) Mohammad Sadegh Hashemzadeh محمد صادق هاشم زاده msh.biotechnology@gmail.com 9600319475328460025375 9600319475328460025375 No Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران، ایران. Hosein Honari حسین هنری msh.biotechnology@gmail.com 9600319475328460025376 9600319475328460025376 Yes Comprehensive University of Imam Hossein, Tehran, Iran. دانشگاه جامع امام حسین(ع) Jafar Mousavy جعفر موسوی msh.biotechnology@gmail.com 9600319475328460025377 9600319475328460025377 No Comprehensive University of Imam Hossein, Tehran, Iran. دانشگاه جامع امام حسین(ع) Firouz Ebrahimi فیروز ابراهیمی msh.biotechnology@gmail.com 9600319475328460025378 9600319475328460025378 No Comprehensive University of Imam Hossein, Tehran, Iran. دانشگاه جامع امام حسین(ع) Hosein Pourhakkak حسین پورحکاک msh.biotechnology@gmail.com 9600319475328460025379 9600319475328460025379 No Comprehensive University of Imam Hossein, Tehran, Iran. دانشگاه جامع امام حسین(ع)