[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: درباره نشريه :: صفحه اصلي :: آخرين شماره :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 29، شماره 5 - ( 8-1400 ) ::
جلد 29 شماره 5 صفحات 74-63 برگشت به فهرست نسخه ها
بهینه‌سازی فرایند رفولدینگ ایمونوتوکسین ضد گیرندۀ فاکتور رشد اپیدرمی تولید شده در باکتری اشریشیاکلای
بهمن اکبری*
گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه، کرمانشاه، ایران ، ba1389@yahoo.com
چکیده:   (652 مشاهده)
مقدمه: بیان بیش‌ازحد EGFR با سرطان‌زایی همراه است و در بیش از 70 درصد سرطان‌های سر و گردن دیده می‌شود. بیان ایمونوتوکسین ضد EGFR که به‌عنوان جایگزینی برای آنتی‌بادی کامل طراحی‌شده است، به تولید پروتئین تجمع‌یافته موسوم به اینکلوژن‌بادی منجر می‌گردد. هدف از این مطالعه بررسی دو روش اورۀ 8 مولار و گوانیدین هیدروکلراید 6 مولار برای به دست آوردن ایمونوتوکسین به‌عنوان فرم محلول و با تاشدگی صحیح بود.
مواد و روش ها: سلول‌های BL21 (DE3) حاوی وکتور pET28a-huimmunotoxin توسط 1 میلی‌مولار IPTG در دمای 37 درجۀ سانتی‌گراد به مدت 24 ساعت القا شد و میزان بیان توسط SDS-PAGE بررسی گردید. ایمونوتوکسین به‌دست‌آمده که به‌صورت اینکلوژن‌بادی بود، جداگانه در اورۀ 8 مولار و گوانیدین هیدروکلراید 6 مولار حل شد و سپس با کروماتوگرافی Ni-NTA خالص گردید که به‌صورت تک باند در SDS-PAGE دیده شد. برای ریفولد مناسب ایمونوتوکسین به‌دست‌آمده، نمونه‌های حاصل از تخلیص در کیسۀ‌‌ دیالیز ریخته و طی یک فرایند چندمرحله‌ای موسوم به stepwise dialysis، عوامل دناتوره‌کننده حذف گردیدند. واکنش‌پذیری ایمونوتوکسین تخلیص‌شدۀ‌‌ ریفولدشده توسط تکنیک الایزا با استفاده از لایزت سلولی A431 ارزیابی گشت.
یافته‌ها: ایمونوتوکسین به مقدار 17mg/ml توسط باکتری به‌صورت اینکلوژن‌بادی بیان شد. ایمونوتوکسین انسانی ریفولدشده با سلول‌های A431 واکنش‌پذیری بالایی داشت که نشان‌دهندۀ تاشدگی مناسب ایمونوتوکسین خالص‌شده بود. فعالیت اتصالی 50 درصد ایمونوتوکسین انسانی‌شدۀ به‌دست‌آمده از روش‌های اوره و گوانیدین هیدروکلراید، به‌ترتیب 8/0 و 7/1 میکروگرم بر میلی‌لیتر بود.
بحث و نتیجه‌گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که روش اوره‌، روش مؤثری در محلول‌سازی و ایجاد فولدینگ مناسب در ایمونوتوکسین‌هایی است که در باکتری به‌صورت اینکلوژن‌بادی تولید می‌شوند.
واژه‌های کلیدی: اوره، ایمونوتوکسین، اینکلوژن‌بادی، گوانیدین هیدروکلراید، رفولدینگ
متن کامل [PDF 622 kb]   (218 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: بیوتکنولوژی
دریافت: 1400/3/11 | پذیرش: 1400/6/30 | انتشار: 1400/8/17
فهرست منابع
1. Mathew M, Verma RS. Humanized immunotoxins a new generation of immunotoxins for targeted cancer therapy. Cancer Sci2009;100:1359-65. doi. 10.1111/j.1349-7006.2009.01192.x
2. Uribe ML, Marrocco I, Yarden Y. EGFR in cancer signaling mechanisms drugs and acquired resistance. Cancers2021;13:2748. doi.10.3390/cancers13112748
3. Li YM, Hall WA. Targeted toxins in brain tumor therapy. Toxins2010;2:2645-62. doi.10.3390/toxins2112645
4. Davies RL, Grosse VA, Kucherlapati R, Bothwell M. Genetic analysis of epidermal growth factor action: assignment of human epidermal growth factor receptor gene to chromosome 7. Proc NatI Acad Sci1980;77:4188-92. doi. 10.1073/pnas.77.7.4188
5. Mckenna N. Challenges in scale up of antibody production companies overcoming obstacles In production process. Genet Eng2001;21:10.
6. Li M, Su ZG, Janson JC. Invitro protein refolding by chromatographic procedures. Prot Expr Pur2004;33:1-10. doi.10.1016/j.pep.2003.08.023
7. Tsumoto K, Shinoki K, Kondo H, Uchikawa M, Juji T, Kumagai I. Highly efficient recovery of functional single chain Fv fragments from inclusion bodies overexpressed in Escherichia coli by controlled introduction of oxidizing reagent application to a human single chain Fv fragment. J Immunol Meth1998;219:119-29. doi.10.1016/s0022-1759(98)00127-6
8. Sinacola JR, Robinson AS. Rapid refolding and polishing of single chain antibodies from Escherichia coli inclusion bodies. Prot Expr Pur2002;26:301-8. doi.10.1016/s1046-5928(02)00538-7
9. Menezes MA, Aires KA, Ozaki CY, Ruiz RM, Pereira MC, Abreu PA, et al. Cloning approach and functional analysis of anti intimin single chain variable fragment. BMC Res Notes2011;4:1. doi.10.1186/1756-0500- -30
10. Zettlmeissl G, Rudolph R, Jaenicke R. Reconstitution of lactic dehydrogenase. Noncovalent aggregation vs. reactivation. 1. Physical properties and kinetics of aggregation. Biochemistry1979;18 :5567-71. doi.10.1021/bi00592a007
11. Singh SM, Panda AK. Solubilization and refolding of bacterial inclusion body proteins. J Biosci Bioeng2005;99:303-10. doi. 10.1263/jbb.99.303
12. Gerami SM, Farajnia S, Mahboudi F, Babaei H. Optimizing refolding condition for recombinant tissue plasminogen activator. Iran J Biotechnol 2011;9:253-9.
13. Goodman M. Market watch sales of biologics to show robust growth through to 2013. Nat Rev Drug Discov2009; 8:837. doi.10.1038/nrd3040
14. Demain AL, Vaishnav P. Production of recombinant proteins by microbes and higher organisms. Biotechnol Adv2009;27:297-306. doi. 10.1016/j.biotechadv.2009.01.008
15. Bhopale G, Nanda R. Recombinant DNA expression products for human therapeutic use. Curr Sci2005;89:614-22.
16. Zhang L, Chou CP, Mooyoung M. Disulfide bond formation and its impact on the biological activity and stability of recombinant therapeutic proteins produced by Escherichia coli expression system. Biotechnol Adv2011;29:923-9. doi.10.1016/j.biotechadv.2011.07.013
17. Walsh G. Biopharmaceuticals: recent approvals and likely directions. Trend Biotechnol2005;23:553-8. doi.10.1016/j.tibtech.2005.07.005
18. Tsumoto K, Ejima D, Kumagai I, Arakawa T. Practical considerations in refolding proteins from inclusion bodies. Prot Exp Pur2003;28:1-8. doi.10.1016/s1046-5928(02)00641-1
19. Ahmad ZA, Yeap SK, Ali AM, Ho WY, Alitheen NBM, Hamid M. scFv antibody: principles and clinical application. Clin Dev Immunol2012;2012. doi.10.1155/2012/980250
20. Weisser NE, Hall JC. Applications of single chain variable fragment antibodies in therapeutics and diagnostics. Biotechnol Adv2009;27:502-20. doi.10.1016/j.biotechadv.2009.04.004
21. Baneyx F, Mujacic M. Recombinant protein folding and misfolding in Escherichia coli. Nat Biotechnol2004;22:1399-408. doi.10.1038/nbt1029.
22. Villaverde A, Carrio MM. Protein aggregation in recombinant bacteria biological role of inclusion bodies. Biotechnol let2003;25:1385-95. doi.10.1023/a:1025024104862
23. Yang Z, Zhang L, Zhang Y, Zhang T, Feng Y, Lu X, et al. Highly efficient production of soluble proteins from insoluble inclusion bodies by a two step denaturing and refolding method. PLos One2011;6:22981. doi.10.1371/journal.pone.0022981
24. Oganesyan N, Kim SH, Kim R. On column chemical refolding of proteins. Pharmacogenomics 2004;4:22-5.
25. Goldstein NI, Giorgio NA, Jones ST, Saldanha JW. Humanized anti EGF receptor monoclonal antibody. Patents; 20062:231-6.
26. Sun H, Wu G, Chen Y, Tian Y, Yue Y, Zhang G. Expression production and renaturation of a functional single chain variable antibody fragment against human ICAM1. Braz J. Med Biol Res2014;47:540-7. doi.10.1590/1414-431x20143276
27. Akbari B, Farajnia S, Zarghami N, Mahdieh N, Rahmati M, Khosroshahi SA, et al. Construction expression and activity of a novel immunotoxin comprising a humanized antiepidermal growth factor receptor scFv and modified Pseudomonas aeruginosa exotoxin A. Antican Drug2017;28:263-70. doi. 10.1097/CAD.0000000000000452
28. Akbari B, Farajnia S, Zarghami N, Mahdieh N, Rahmati M, Khosroshahi SA, et al. Design expression and evaluation of a novel humanized single chain antibody against epidermal growth factor receptor. Prot Exp Pur2016;127:8-15. doi.10.1016/j.pep.2016.06.001
29. Buchner J, Rudolph R. Renaturation, purification and characterization of recombinant F ab-fragments produced in Escherichia coli. Biotechnology 1991;9(2):157-62. doi.10.1038/nbt0291-157
30. Kim SH. Expression and purification of recombinant immunotoxin a fusion protein stabilizes a single chain Fv in denaturing condition. Prot Exp Pur2003;27:85-9. doi. 10.1016/s1046-5928(02)00539
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA

Ethics code: IR.KUMS.REC.1398.568



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Akbari B. Optimization of the Refolding Process for Recombinant Anti-EGFR Immunotoxin Produced in the Escherichia coli. sjimu 2021; 29 (5) :63-74
URL: http://sjimu.medilam.ac.ir/article-1-7119-fa.html

اکبری بهمن. بهینه‌سازی فرایند رفولدینگ ایمونوتوکسین ضد گیرندۀ فاکتور رشد اپیدرمی تولید شده در باکتری اشریشیاکلای. مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی ایلام 1400; 29 (5) :74-63

URL: http://sjimu.medilam.ac.ir/article-1-7119-fa.html



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 29، شماره 5 - ( 8-1400 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله دانشگاه علوم پزشکی ایلام Journal of Ilam University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.15 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 4536
Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)