[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: درباره نشريه :: صفحه اصلي :: آخرين شماره :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 29، شماره 2 - ( 3-1400 ) ::
جلد 29 شماره 2 صفحات 54-43 برگشت به فهرست نسخه ها
بهینه‌سازی کشت سلول‌های دندریتیک نابالغ از سلول‌های مغز استخوان موش در شرایط عاری از اندوتوکسین
عاطفه صادقی شرمه1 ، سیما حبیب زاده1، عادله تقی خانی2، سیما رأفتی1، نگار سید* 3
1- گروه تحقیقات انگل‌شناسی، قارچ‌شناسی و ایمونولوژی، بخش ایمونوتراپی و تحقیقات واکسن لیشمانیا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
2- گروه ایمونولوژی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
3- گروه تحقیقات انگل‌شناسی، قارچ‌شناسی و ایمونولوژی، بخش ایمونوتراپی و تحقیقات واکسن لیشمانیا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران ، n_seyed@gmail.com
چکیده:   (1475 مشاهده)
مقدمه: سلول‌های دندریتیک در مطالعات پایه و همچنین تحقیقات دربارۀ واکسن بسیار اهمیت دارند؛ اما جداسازی و کشت این سلول‌ها به علت تعداد اندک در بافت‌ها، با چالش‌هایی روبروست. با توجه به اینکه روش استانداردی وجود ندارد، در این پژوهش، به برخی از عوامل مؤثر در افزایش بازدهی جداسازی سلول‌های دندریتیک از مغز استخوان موش BALB/c پرداخته‌شده است.
مواد و روش‌ها: پس از جداسازی سلول‌های مغز استخوان از فمور و تیبیا و هم‌جواری با سایتوکاین GM-CSF، در روز سوم، نیمی از سلول‌ها به پلیت جدید انتقال داده و در روز پنجم، از اولیگونوکلئوتید CpG برای تحریک سلول‌ها استفاده شد. در روزهای پنجم و هفتم، بقای سلول‌ها و همچنین شاخص‌های فنوتیپی CD11C، MHC-II و CD86 با فلوسایتومتری بررسی گردید.
یافته‌های پژوهش: در این مطالعه مشخص شد که حضور اندوتوکسین در مراحل کشت سلول‌های نابالغ، به‌طور معنی‌دار (P<0.05) سبب کاهش بازیابی سلول‌های دندریتیک می‌شود. علاوه بر این، تعداد کمتر از یک میلیون سلول در پلیت‌های غیرچسبنده سبب بقای بیشتر و بازدهی بالا می‌گردد. انتقال سلول‌ها در روز سوم به پلیت جدید هم به‌عنوان راهکاری برای جلوگیری از بلوغ زودرس سلول‌های دندریتیک و مرگ ناشی از آن معرفی شد. پس از دست‌یابی به سلول‌های نابالغ در مجاورت GM-CSF، می‌توان برای القای مسیر Th1 از اولیگونوکلئوتید CpG در روز هفتم استفاده کرد. اختلاف معنا‌دار (P<0.05) با کنترل نشان داد که CpG می‌تواند به‌عنوان محرک در القای بلوغ پس از تیمار با GM-CSF به‌کار گرفته شود.
بحث و نتیجه­گیری: بهینه‌سازی کشت سلول‌های دندریتیک به لحاظ شرایط مختلف کشت، نقش مهمی در بازدهی بازیابی این سلول‌ها دارد.
واژه‌های کلیدی: مغز استخوان، سلول‌های دندریتیک، بهینه‌سازی کشت، اندوتوکسین
متن کامل [PDF 1199 kb]   (376 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ایمونولوژی
دریافت: 1399/8/11 | پذیرش: 1399/11/26 | انتشار: 1400/3/10
فهرست منابع
1. Qian C, Cao X. Dendritic cells in the regulation of immunity and inflammation. Semin Immunol2018;35:3-11.
2. Steinman RM, Kaplan G, Witmer MD, Cohn ZA. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. V. Purification of spleen dendritic cells, new surface markers, and maintenance in vitro. J Exp Med1979;149:1-16. doi.10.1084/jem.149.1.1
3. Shang N, Figini M, Shangguan J, Wang B, Sun C, Pan L, et al. Dendritic cells based immunotherapy. Am J Cancer Res 2017;7:2091.
4. Gu YZ, Zhao X, Song XR. Ex vivo pulsed dendritic cell vaccination against cancer. Acta Pharmacol Sin2020;2:1-11.
5. Lutz MB, Suri RM, Niimi M, Ogilvie AL, Kukutsch NA, Rößner S, et al. Immature dendritic cells generated with low doses of GM-CSF in the absence of IL‐4 are maturation resistant and prolong allograft survival in vivo. Eur J Immunol 2000;30:1813-22. doi.10.1002/1521-4141(200007)30:7<1813
6. Menges M, Baumeister T, Rössner S, Stoitzner P, Romani N, Gessner A, et al. IL4 supports the generation of a dendritic cell subset from murine bone marrow with altered endocytosis capacity. J Leukoc Biol 2005;77:535-43. doi.10.1189/jlb.0804473
7. Yokota A, Takeuchi H, Maeda N, Ohoka Y, Kato C, Song SY, et al. GM-CSF and IL4 synergistically trigger dendritic cells to acquire retinoic acid producing capacity. Int Immunol2009;21:361-77.doi.10.1093/intimm/dxp003
8. Gosavi RA, Salwe S, Mukherjee S, Dahake R, Kothari S, Patel V, et al. Optimization of ex vivo murine bone marrow derived immature dendritic cells: A comparative analysis of flask culture method and mouse cd11c positive selection kit method. Bone Marrow Res 2018;2:123-7.doi.10.1155/2018/3495086
9. Lutz MB, Kukutsch N, Ogilvie AL, Roßner S, Koch F, Romani N, et al. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J Immunol Meth 1999;223:77-92. doi.10.1016/s0022-1759(98)00204-x.
10. Inaba K, Inaba M, Romani N, Aya H, Deguchi M, Ikehara S, et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J Exp Med1992;176:1693-702.doi.10.1084/jem.176.6.1693
11. Arab S, Motamedi M, Khansari N, Moazzeni SM, Gheflati Z, Hadjati J. Dendritic cell maturation with CpG for tumor immunotherapy. Iran J Immunol 2006;3:99-105.
12. Arab S, Motamedi M, Hajati J. Culture and proliferation of dendritic cells from mouse bone marrow progenitors J Anim Biol 2008;1:35-40.
13. Dewitte H, Verbeke R, Breckpot K, Vandenbroucke RE, Libert C, De Smedt SC, et al. Choose your models wisely: how different murine bone marrow derived dendritic cell protocols influence the success of nanoparticulate vaccines in vitro. J Cont Release 2014;195:138-46.
14. Winzler C, Rovere P, Rescigno M, Granucci F, Penna G, Adorini L, et al. Maturation stages of mouse dendritic cells in growth factor dependent long term cultures. J Exp Med 1997;185:317-28.
15. Rescigno M, Citterio S, Thery C, Rittig M, Medaglini D, Pozzi G, et al. Bacteria induced neo biosynthesis, stabilization, and surface expression of functional class I molecules in mouse dendritic cells. Proc Natl Acad Sci USA. 1998;95:5229-34.doi.10.1073/pnas.95.9.5229.
16. Nomura Y, Fukui C, Morishita Y, Haishima Y. A biological study establishing the endotoxin limit for in vitro proliferation of human mesenchymal stem cells. Reg Ther 2017;7:45-51. doi.10.1016/j.reth.2017.08.004.
17. Felzmann T, Huttner KG, Breuer SK, Wimmer D, Ressmann G, Wagner D, et al. Semi mature IL-12 secreting dendritic cells present exogenous antigen to trigger cytolytic immune responses. Cancer Immunol Immunother 2005;54:769-80.doi.10.1007/s00262-004-0637-2
18. Michael Dohnal A, Luger R, Paul P, Fuchs D, Felzmann T. CD40 ligation restores type 1 polarizing capacity in TLR4‐activated dendritic cells that have ceased interleukin12 expression. J Cell Mol Med2009;13:1741-50.doi.10.1111/j.1582-4934.2008.00584.x.
19. Taghikhani A, Hassan ZM, Ebrahimi M, Moazzeni SM. MicroRNA modified tumor derived exosomes as novel tools for maturation of dendritic cells. J Cell Physiol2019;234:9417-27.doi.10.1002/jcp.27626.
20. Wang W, Li J, Wu K, Azhati B, Rexiati M. Culture and identification of mouse bone marrow derived dendritic cells and their capability to induce T lymphocyte proliferation. Med Sci Int J Exp Clin Res2016;22:244-50.doi.10.12659/msm.896951
21. Bonab SF, Salehi TZ, Khansari N, Hadjati J, Massoud A. An optimized method for ex vivo generation of dendritic cells. J Vet Res 2014;69:17-23.
22. Aghdami N, Moazeni S, Gharib Doust M, Mahdavi M. Comparison of different methods for dendritic cell generation from mouse bone marrow. Cell J 2007;9:81-90.
23. Daneshmandi S, Pourfathollah AA, Forouzandeh-Moghaddam M. Chitosan nanopolymers effect in activating of mouse bone marrow derived dendritic cells. J Birjand Uni Med Sci 2014;21:160-8.
24. Haase C, Jorgensen TN, Michelsen BK. Both exogenous and endogenous interleukin10 affects the maturation of bone marrow derived dendritic cells in vitro and strongly influences Tcell priming in vivo. Immunology 2002;107:489-99.
25. Jin D, Sprent J. GM-CSF culture revisited: preparation of bulk populations of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J Immunol 2018;201:3129-39.
26. Gholizadeh Z, Tavakkolafshari J, Nikpoor AR, Jalali SA, Jaafari MR. Enhanced immune response induced by P5 HER2 neu derived peptide pulsed dendritic cells as a preventive cancer vaccine. J Cell Mol Med 2018;22:558-67.doi.10.1111/jcmm.13343.
27. Jakob T, Walker PS, Krieg AM, Udey MC, Vogel JC. Activation of cutaneous dendritic cells by CpG containing oligodeoxynucleotides: a role for dendritic cells in the augmentation of Th1 responses by immunostimulatory DNA. J Immunol1998;161:3042-9.
28. Heufler C, Koch F, Stanzl U, Topar G, Wysocka M, Trinchieri G, et al. Interleukin12 is produced by dendritic cells and mediates T helper 1 development as well as interferon‐γ production by T helper 1 cells. Eur J Immunol1996;26:659-68. doi.10.1002/eji.1830260323.
29. Macatonia SE, Hosken NA, Litton M, Vieira P, Hsieh CS, Culpepper JA, et al. Dendritic cells produce IL-12 and direct the development of Th1 cells from naive CD4+ T cells. J Immunol1995;154:5071-9.
30. Agallou M, Pantazi E, Tsiftsaki E, Toubanaki DK, Gaitanaki C, Smirlis D, et al. Induction of protective cellular immune responses against experimental visceral leishmaniasis mediated by dendritic cells pulsed with the Nterminal domain of Leishmania infantum elongation factor2 and CpG oligodeoxynucleotides. Mol Immunol2018;103:7-20. doi. 10.1016/j.molimm.2018.08.004.
31.  
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA

Ethics code: IP.PII.REC.1395.99



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Sadeghi Shermeh A, HAbibzadeh S, Taghikhani A, Rafati S, Seyed N. Optimized Mouse BMDC Isolation and Culture under Endotoxin-Free Conditions. Journal of Ilam University of Medical Sciences 2021; 29 (2) :43-54
URL: http://sjimu.medilam.ac.ir/article-1-6831-fa.html

صادقی شرمه عاطفه، حبیب زاده سیما، تقی خانی عادله، رأفتی سیما، سید نگار. بهینه‌سازی کشت سلول‌های دندریتیک نابالغ از سلول‌های مغز استخوان موش در شرایط عاری از اندوتوکسین. مجله دانشگاه علوم پزشکی ایلام 1400; 29 (2) :54-43

URL: http://sjimu.medilam.ac.ir/article-1-6831-fa.html



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 29، شماره 2 - ( 3-1400 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله دانشگاه علوم پزشکی ایلام Journal of Ilam University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.14 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 4541