Journal of Ilam University of Medical Sciences
مجله دانشگاه علوم پزشکی ایلام
J. Ilam Uni. Med. Sci.
Medical Sciences
http://sjimu.medilam.ac.ir
96
journal96
1563-4728
2588-3135
doi
fa
jalali
1399
8
1
gregorian
2020
11
1
28
5
online
1
fulltext
fa
بررسی میزان بیان ژن ID1 در سلول های AGS ترنسفکت
شده با وکتور نوترکیب pFLAG-CMV3-tagD
Evaluation of the Expression of ID1 Gene in AGS Cells
Transfected with pFLAG-CMV3-tagD
Recombinant Vector
ژنتیک
Molecular Genetics
پژوهشي
Research
<strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مقدمه:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ID</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، باعث افزایش تکثیر سلولی می شود و از طرفی تمایز را مهار کرده که ارتباط آن با روند تومور­زایی روده را مشخص می­ کند. عفونت هلیکوباکتر با بیان ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">­</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های مختلف </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ID</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در ارتباط است و بنا بر این هدف از این تحقیق بررسی بیان ژن­ </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ID1</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در سلول ­های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">AGS</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pFLAG-CMV-3-tagD</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> است. </span></span><br>
<strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش­ ها:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">در پژوهــش حاضر سلول ­های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">AGS</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در محیط کشت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RPMI-1640</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> حاوی درصد سرم جنین گاوی رشد داده­ شد. این سلول­ ها با دو پلاسمید </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pFLAG-CMV-3-tagD</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> یا </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pFLAG-CMV-3</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ترانسفکت شدند و سلول ­های دریافت کننده پلاسمید با افزودن 600 میلی­ گرم در لیتر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">G418</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، انتخاب گردیدند. سپس </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RNA</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> کل سلول با استفاده از محلول </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RNX-Plus</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تخلیص شد و سنتز </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">cDNA</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> با کمک کیت انجام شد. سطح بیان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">mRNA</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ID1</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">q-RT PCR</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و با کاربرد پرایمرهای مناسب بررسی شد. در نهایت با استفاده از نرم افزار </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> SPSS</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">و آزمون های آماری </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">t-test</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Indepent </span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> بیان هر یک از ژن­ ها مورد بررسی قرار گرفت.</span></span><br>
<strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته های پژوهش:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">با روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RT-PCR</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، بیان موفقیت آمیز ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">tagD</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> هلیکوباکتر پیلوری در سلول ­های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">AGS</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تایید شد. آنالیز بیان ژن نشان داد که بیان ژن­ </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ID1</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به صورت معنی داری در سلول ­های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">AGS</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تیمار شده با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">tagD</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> نسبت به سلـــول­ های کنترل، کاهـــش یافـــته است(</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">P=0.0113</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">). </span></span><br>
<strong><em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بحث و نتیجه گیری:</span></span></em></strong> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">تحقیق حاضر نشان داد که بیان ژن­ </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ID1</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در سلول ­های تحت تیمار با ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">tagD</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> هلیکوباکتر پیلوری، تغییر می ­یابد و به نظر می ­رسد، ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">tagD</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> هلیکوباکتر پیلوری در ایجاد این تغییر بیان نقش داشته­ باشد.</span></span><br>
<em>Introduction:</em> The ID protein enhances cell proliferation and inhibits differentiation, which determines its association with the process of intestinal tumorigenesis. Helicobacter infection is associated with the expression of different ID genes. This study aimed to investigate the expression of the ID1 gene in AGS cells transfected with the pFLAG-CMV-3-tagD recombinant vector.<br>
<br>
<em>Materials & Methods:</em> In the present study, AGS cells were cultured in the RPMI-1640 medium containing 10% bovine fetal serum. Subsequently, these cells were transfected with two pFLAG-CMV-3-tagD or pFLAG-CMV-3 plasmids. Moreover, the plasmid recipient cells were selected by adding 600 mg/LG418. Following that, wwhole-cell RNA was purified using RNX-Plus solution, and the cDNA was synthesized using a kit. The mRNA expression level of ID1 was assessed using q-RT PCR with appropriate primers. Eventually, the expression of each gene was evaluated in SPSS software through an independent t-test.<em> Ethics</em> <em>code:</em> IR. IAU.SHK.REC.1399.026<br>
<br>
<em>Findings:</em> The results of RT-PCR confirmed the successful expression of the helicobacter pylori tagD gene in AGS cells. Moreover, the gene expression analysis showed that the ID1 gene expression was significantly decreased in tagD-treated AGS cells, compared to the control cells (P=0.0113).<br>
<br>
<em>Discussions & Conclusions:</em> The present study showed that the ID1 gene expression was altered in cells treated with the helicobacter pylori tagD gene. In addition, it seems that the helicobacter pylori tagD gene is involved in this expression change.<br>
باکتری هلیکوباکتر پیلوری, tagD,ID1
Helicobacter pylori, TagD, ID1
11
20
http://sjimu.medilam.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5920-1&slc_lang=fa&sid=1
Marzieh
Rostam zade renani
مرضیه
رستم زاده رنانی
rostamzade112@gmail.com
9600319475328460042727
9600319475328460042727
No
Dept of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran
گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
Abbas
Doosti
عباس
دوستی
abbasdoosti@yahoo.com
9600319475328460042728
9600319475328460042728
Yes
Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران