:: دوره 28، شماره 5 - ( 9-1399 ) ::
جلد 28 شماره 5 صفحات 20-11 برگشت به فهرست نسخه ها
بررسی میزان بیان ژن‌ ID1 در سلول ‌های AGS ترنسفکت شده با وکتور نوترکیب pFLAG-CMV3-tagD
مرضیه رستم زاده رنانی1 ، عباس دوستی* 2
1- گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
2- مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران ، abbasdoosti@yahoo.com
چکیده:   (1771 مشاهده)
مقدمه: پروتئین ID، باعث افزایش تکثیر سلولی می شود و از طرفی تمایز را مهار کرده که ارتباط آن با روند تومور­زایی روده را مشخص می­ کند. عفونت هلیکوباکتر با بیان ژن ­های مختلف ID در ارتباط است و بنا بر این هدف از این تحقیق بررسی بیان ژن­ ID1 در سلول ­های AGS ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب pFLAG-CMV-3-tagD است.
مواد و روش­ ها: در پژوهــش حاضر سلول ­های AGS در محیط کشت RPMI-1640 حاوی درصد سرم جنین گاوی رشد داده­ شد. این سلول­ ها با دو پلاسمید pFLAG-CMV-3-tagD یا pFLAG-CMV-3 ترانسفکت شدند و سلول ­های دریافت کننده پلاسمید با افزودن 600 میلی­ گرم در لیتر G418، انتخاب گردیدند. سپس RNA کل سلول با استفاده از محلول RNX-Plus تخلیص شد و سنتز cDNA با کمک کیت انجام شد. سطح بیان mRNA ژن ID1 به روش q-RT PCR و با کاربرد پرایمرهای مناسب بررسی شد. در نهایت با استفاده از نرم افزار  SPSSو آزمون ‌های آماری t-test Indepent  بیان هر یک از ژن­ ها مورد بررسی قرار گرفت.
یافته های پژوهش: با روش RT-PCR، بیان موفقیت آمیز ژن tagD هلیکوباکتر پیلوری در سلول ­های AGS تایید شد. آنالیز بیان ژن نشان داد که بیان ژن­ ID1 به صورت معنی ‌داری در سلول ­های AGS تیمار شده با tagD نسبت به سلـــول­ های کنترل، کاهـــش یافـــته است(P=0.0113).
بحث و نتیجه گیری: تحقیق حاضر نشان داد که بیان ژن­ ID1 در سلول ­های تحت تیمار با ژن tagD هلیکوباکتر پیلوری، تغییر می ­یابد و به نظر می ­رسد، ژن tagD هلیکوباکتر پیلوری در ایجاد این تغییر بیان نقش داشته­ باشد.
 
واژه‌های کلیدی: باکتری هلیکوباکتر پیلوری، tagD، ID1
متن کامل [PDF 862 kb]   (629 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ژنتیک
دریافت: 1398/10/18 | پذیرش: 1399/3/25 | انتشار: 1399/10/10
فهرست منابع
1. Wang W, Du M, Li Z, Zhang L, Li Q, Xu Z, et al. A genetic variant located in miR-146b promoter region is associated with prognosis of gastric cancer. Cancer Epidemiol Preve Biomark2018;27:822-8. doi: 10.1158/1055-9965.EPI-17-1054.
2. Gantuya B, Oyuntsetseg K, Bolor D, Erdene Y, Sanduijav R, Davaadorj D, et al. Evaluation of serum markers for gastric cancer and its precursor diseases among high incidence and mortality rate of gastric cancer area. Gastr Cancer2019;22:104-12. doi.10.1007/s10120-018-0844-8.
3. Khalili Z, Moghanibashi M, Ghaderi A. Association of rs61803665 polymorphism in the F11R gene with increased risk of gastric cancer. Asian Pac J Cancer Biol 2019;4:15-8. doi.10.31557/apjcb.2019.4.1.15-18.
4. Carneiro F, Grabsch HI. Pathogenesis of gastric cancer. Minimally Invasive Foregut Surgery for Malignancy 2015;5:61-72. doi.10.1007/978-3-319-09342-0_6.
5. Arslan N, Yılmaz O, Demiray E. Importance of antimicrobial susceptibility testing for the management of eradication in Helicobacter pylori infection. World J Gastroenterol2017;23:2854. doi.10.3748/wjg.v23.i16.2854.
6. Graham DY. Helicobacter pylori update gastric cancer reliable therapy and possible benefits. Gastroenterology2015;148:719-31. doi.10.1053/j.gastro.2015.01.040
7. Austin CM, Wang G, Maier RJ. Aconitase functions as a pleiotropic posttranscriptional regulator in Helicobacter pylori. J Bacteriol2015;197:3076-86. doi.10.1128/JB.00529-15
8. Wang G, Olczak AA, Walton JP, Maier RJ. Contribution of the Helicobacter pylori thiol peroxidase bacterioferritin comigratory protein to oxidative stress resistance and host colonization. Infec Immun 2005;73:378-84. doi.10.1128/IAI.73.1.378-384.2005
9. Manzo BA, Crabtree JE, Campbell MF, Tweedle D, Potten CS, Bajaj M, et al. Helicobacter pylori regulates the expression of inhibitors of DNA binding proteins by gastric epithelial cells. Microbes Infec 2006;2:1064-74. doi.10.1016/j.micinf.2005.11.003
10. Kyei F, Asante DB, Edekor JAM, Sarpong E, Gavor E, Konja D. Down regulation of Id1 and Id3 genes affects growth and survival of human umbilical vein endothelial cells. J Appl Biol Biotechnol Vol 2016;4:23-9. doi.10.7324/JABB.2016.40204.
11. Chen S, Miyazaki M, Chandra V, Fisch KM, Chang AN, Murre C. Id3 orchestrates germinal center B cell development. Mole Cellular Biol2016;36:2543-52. doi.10.1128/MCB.00150-16.
12. Murase R, Sumida T, Kawamura R, Onish A, Hamakawa H, Mcallister SD, et al. Suppression of invasion and metastasis in aggressive salivary cancer cells through targeted inhibition of ID1 gene expression. Cancer letters2016;377:11-6. doi.10.1016/j.canlet.2016.04.021.
13. Li D, Ding J, Wang X, Wang C, Wu T. Fibronectin promotes tyrosine phosphorylation of paxillin and cell invasiveness in the gastric cancer cell line AGS. Tum J 2009;95:769-79. doi.10.1177/030089160909500621.
14. Safarpour M, Kazemi Z, Doosti E, Doosti A. Cloning tagD gene from helicobacter pylori in PFLAG-CMV-3 eukaryotic vector to generate a DNA vaccine. J Jahrom Uni Med Sci 2016;14:43-50. doi. mj.jums.ac.ir/article-1-910-en.pdf.
15. CMV-3 eukaryotic vector to generate a DNA vaccine. J Jahrom Uni Med Sci 2016;14:43-51.doi. jmj.jums.ac.ir/article-1-910-en.pdf.
16. Marabita F, Candia P, Torri A, Tegner J, Abrignani S, Rossi RL. Normalization of circulating microRNA expression data obtained by quantitative real-time RT-PCR. Brief Bioinform2015;17:204-12. doi.10.1093/bib/bbv056/.
17. Pandit S, Boktor M, Alexander JS, Becker F, Morris J. Gastroesophageal reflux disease a clinical overview for primary care physicians. Pathophysiology 2018;25:1-11. doi.10.1016/j.pathophys.2017.09.001.
18. Li L, Wei X, Wu B, Xiao Y, Yin M, Yang Q. SiRNA mediated knockdown of ID1 disrupts Nanog and Oct 4 mediated cancer stem cell likeness and resistance to chemotherapy in gastric cancer cells. Oncol lett2017;13:3014-24. doi.10.3892/ol.2017.5828.
19. De S, Zhang B, Shih T, Singh S, Winkler A, Donnelly R, et al. B cell intrinsic role for IRF5 in TLR9/BCR induced human B cell activation, proliferation and plasmablast differentiation. Front Immunol2018;8:1938. doi.10.3389/fimmu.2017.01938.
20. Singh SK, Singh S, Gadomski S, Sun L, Pfannenstein A, Magidson V, et al. Id1 ablation protects hematopoietic stem cells from stress induced exhaustion and aging. Cell Stem Cell2018;23:252-65. doi.10.1016/j.stem.2018.06.001.
21. Sun Y, Lai X, Yu Y, Li J, Cao L, Lin W, et al. Inhibitor of DNA binding 1mediates stemness of colorectal cancer cells through the Id1-c-Myc-Plac8 axis via the Wnt/β-catenin and Shh signaling pathways. Cancer Manage Res2019;11:6855. doi.10.2147/CMAR.S207167.

Ethics code: IR.IAU.SHK.REC.1399.026



XML   English Abstract   Print



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 28، شماره 5 - ( 9-1399 ) برگشت به فهرست نسخه ها